對于ELISA試劑盒檢測樣品的處理方法很多實(shí)驗新手還不是很清楚，咨詢(xún)這方面問(wèn)題的客戶(hù)也較多，以下為上海酶聯(lián)生物技術(shù)部整理出的ELISA試劑盒檢測樣品的處理方法：
 

　　1、 血清
 

　　血清是zui常用于ELISA檢測的一類(lèi)樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。
 

　　用無(wú)熱原、無(wú)內毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)一夜，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘，仔細收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
 

　　采血過(guò)程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時(shí)會(huì )釋放具有過(guò)氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA檢測中會(huì )有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時(shí)也應避免細菌污染，因為菌體內可能含有內源性的HRP從而導致檢測的假陽(yáng)性。
 

　　2、 血漿
 

　　用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
 

　　常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測時(shí)還應仔細閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū)，檢查試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
 

        3、 細胞培養上清

 

　　取細胞培養上清到離心管，1000×g離心20min，除去細胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
 

　　4、 細胞裂解液
 

　　吸去培養板內的培養基，用胰酶消化細胞，加適量培養基將細胞從培養板上吹下來(lái)。懸浮細胞可省略。
 

　　收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養基，用預冷的PBS潤洗3次。
 

　　加入適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細胞。通常6孔板一個(gè)孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
 

　　將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達到裂解的目的。
 

　　4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
 

　　5、組織勻漿液
 

　　將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
 

　　將組織塊稱(chēng)重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分。
 

　　將組織按一定的比例加入預冷的PBS(臨用前加入蛋白酶抑制劑)勻漿，勻漿時(shí)置于冰上或冰浴中。(通常按組織重量：PBS體積=1:9的比例勻漿，例如1g的組織樣本對應9mL的PBS，具體體積可根據實(shí)驗需要適當調整，檢測后計算樣品濃度時(shí)應乘以相應的稀釋倍數)
 

　　吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
 

　　6、 尿液、唾液等其他液體生物樣本
 

　　1000×g離心20min，取上清即可檢測。
 

　　總的來(lái)說(shuō)，因為ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量，所以應保證所有樣本均為澄清的液體，沉淀或懸浮物都應離心去除。
 

　　為了保證檢測的準確性，保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個(gè)月內檢測；4℃保存的樣本應在1周內進(jìn)行檢測。另外，還應保證樣本不含NaN3，因為NaN3會(huì )抑制HRP的活性，從而導致假陰性的結果。