一直以來(lái)ELISA試劑盒試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個(gè)環(huán)節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。上海酶聯(lián)生物現將操作中各個(gè)環(huán)節常出現問(wèn)題的原因及解決辦法總結于下，以期給各位同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗質(zhì)量。
 

　　下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法。
 

　　一、選擇試劑
 

　　選擇質(zhì)量?jì)?yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
 

　　二、加樣
 

　　1、血清或血漿標本分離不好即進(jìn)行加樣；
 

　　2、手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(cháng)(特別是室內溫度較高時(shí))；
 

　　3、加完標本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。
 

　　解決辦法：
 

　　1、標本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
 

　　2、加樣后及時(shí)放入孵箱。
 

　　3、加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
 

　　4、如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
 

　　5、標本較多時(shí)，請分批操作。
 

　　三、孵育
 

　　1、孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*;
 

　　2、孵育時(shí)間人為延長(cháng)，導致非特異性結合緊附于反應孔周?chē)?，難以清洗*。
 

　　解決辦法：
 

　　1、貼封片或加蓋；
 

　　2、按說(shuō)明步驟嚴格控制操作時(shí)間。
 

       四、洗板

 

　　1、采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。
 

　　2、采用半自動(dòng)洗板機洗板時(shí)，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導致洗板效果差。
 

　　3、反應板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(cháng)。
 

　　解決辦法：
 

　　1、保證洗液注滿(mǎn)各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料)上輕輕拍干；
 

　　2、合理安排，或多用幾臺洗板機。
 

　　五、顯色
 

　　1、顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(cháng)或使用過(guò)期顯色劑；
 

　　2、加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。
 

　　解決辦法：1、顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍色的TMB顯色劑不用；
 

　　2、加樣時(shí)保持顯色劑不外流；
 

　　3、A、B液應避免接觸金屬器械。
 

　　六、終止
 

　　可能原因如加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導致假陽(yáng)性增加。所以在加終止液時(shí)應避免產(chǎn)生氣泡。
 

　　七、讀板
 

　　如讀板時(shí)板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實(shí)現ELISA檢測標準自動(dòng)化，有效提高檢測質(zhì)量。
 

　　在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內質(zhì)控、室間質(zhì)評，以嚴謹的工作作風(fēng)檢測每一份標本，才能保證檢測質(zhì)量。上海酶聯(lián)生物擁有全自動(dòng)酶標儀，這對于實(shí)現ELISA試劑盒標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用。