Elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗。計算方法是以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在半對數坐標紙上繪出標準曲線(xiàn),根據樣品的OD值由標準曲線(xiàn)查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實(shí)際濃度。
Elisa試劑盒在沒(méi)有去離子水或雙蒸水時(shí),可以使用純凈水配制溶液,切勿使用自來(lái)水。
1.樣品稀釋?zhuān)好嘎?lián)免疫反應是一種敏感性很高的反應,如果血清不稀釋?zhuān)豢杀苊鈺?huì )產(chǎn)生很強的非特異性反應,出現假陽(yáng)性。因此,國外檢測血清抗體的試劑盒,均規定將血清稀釋至適當的倍數,以降低非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現出來(lái)。樣品稀釋倍數均通過(guò)大量試驗確定,以保證試驗的靈敏度和特異性。但是,有些用戶(hù)未能?chē)栏癜词褂谜f(shuō)明書(shū)操作,如產(chǎn)品應取10u1樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)瑐€(gè)別用戶(hù)取5u1甚至1u1樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)捎谖焐喜豢杀苊獾卣从袠悠芬约拔⒘恳埔浩鞯木炔粔?,因此造成樣品稀釋倍數不準確,檢測結果出現問(wèn)題。
2.試劑盒平衡:試劑盒中所有試劑和板條均應在試驗前平衡至室溫(約25℃),一般需在室溫放置20~30分鐘以上。平衡時(shí)間太短會(huì )造成試劑混勻不夠,樣品孵育時(shí)間相對縮短,ELISA反應不夠充分。冬季室溫低,可將試劑盒打開(kāi)盒蓋置37℃溫箱20分鐘。稀釋前、后的樣品需要充分混勻,所有試劑在加樣前也須搖勻,以保證試驗的均一性。
3.加樣:盡量操作規范,將液體垂直懸空快速加入到微孔板中,避免加到孔避上。加完試劑后用手適當振蕩或在桌面適當作圓周運動(dòng),使孔內試劑充分混勻,蓋好蓋板膜。
4.洗板:洗液盡量不要溢出孔外;加洗液后要靜置10-15s,甩去板孔中洗液后,一定要用力拍干;及時(shí)更換吸水紙,尤其是拍過(guò)酶標記物的吸水紙一定要棄去,否則可能影響試驗結果。
上海酶聯(lián)生物科技有限公司專(zhuān)業(yè)經(jīng)營(yíng)生物科學(xué)領(lǐng)域的實(shí)驗儀器、研究試劑和實(shí)驗室耗材,致力于向國內外生物科學(xué)研究人員提供服務(wù)。專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)廠(chǎng)家具有先進(jìn)水平的產(chǎn)品推薦給各類(lèi)研究人員;另一方面也非常重視自主產(chǎn)品研究和開(kāi)發(fā),推出了一系列具有競爭力的產(chǎn)品和服務(wù)。同時(shí)國家對于生物行業(yè)的發(fā)展給予了極大的重視,更多地側重于的投入。
以上是Elisa試劑盒樣品進(jìn)行如何正確稀釋你知道嗎?