小鼠畸胎瘤細胞（P19）

小鼠畸胎瘤細胞(P19)
細胞介紹
加拿大渥太華大學(xué)的Me Burney等在1982年從雄性小鼠畸胎瘤中分離得到的，是一種能夠在體外培養的多能干細胞,P19細胞團經(jīng)RA誘導可分化成神經(jīng)元、膠質(zhì)細胞和纖維母細胞；而經(jīng)二甲基亞砜(DM SO)誘導則分化成心肌、骨骼肌和平滑肌細胞;在P19細胞向神經(jīng)元分化的過(guò)程中，神經(jīng)發(fā)育相關(guān)基因的表達模式 基本模擬了正常小鼠神經(jīng)發(fā)育過(guò)程，因此,P19目前被用作一個(gè)研究神經(jīng)發(fā)育的 體外模型。P19細胞作為研究神經(jīng)分化機制的模型，顯著(zhù)區別于其他細胞系的四 大特點(diǎn)是：①它具有正常小鼠的二倍體核型，細胞分裂快，可在體外迅速大量擴 增，多次傳代也不喪失其分化能力。②P19細胞具有多種分化潛力，不同誘導條 件下可定向分化成不同類(lèi)型的細胞，種植到孕鼠囊胚中能分化成多種類(lèi)型細胞。 ③根據P19細胞誘導分化分階段進(jìn)行的特點(diǎn)，能將神經(jīng)分化的早期機制與參與 突起延伸的機制分開(kāi)研究。④該細胞易于轉染，且轉染后仍能正常分化，適于進(jìn) 行細胞基因研究。通過(guò)轉染正?；蛲蛔兊哪康幕?，增強或抑制它們的表達水平 可用于研究這些基因在神經(jīng)分化中的作用。另外，利用反義RNA阻斷內源蛋白 的表達，可用來(lái)觀(guān)察這些蛋白在神經(jīng)分化中的作用。
(references:
1.張金平等.全反式維甲酸體外誘導P19細胞向心肌方向分化.[」]中國組織化學(xué)與 細胞化學(xué)雜志.2012.1
2.梅宇欽等.建立經(jīng)優(yōu)化的促P19鼠胚胎癌細胞神經(jīng)分化模型.浙江大學(xué)學(xué)報（醫 學(xué)版）2012.04)
 
細胞特性
1)來(lái)源：胚胎；崎胎癌
2)形態(tài)：上皮細胞樣
3)含量：>lxl06個(gè)/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式：（1)干冰運輸，收到后 立即轉入液氮凍存或直接復蘇；（2)存活細胞，收到后應繼續生長(cháng)，傳代達到細 胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。
 
小鼠畸胎瘤細胞(P19)細胞培養步驟
一.培養基及培養凍存條件準備：
1.準備MEMa培養基(MEMa+培養基(GIBCO,添加NaHC〇31.5g八，肌醇43.2mg八，葉酸8.82mg八,0-巰基乙醇7.8mg八)，90%; BCS，7.5%;胎牛血清，2.5%。
2. 培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%*培養基，10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二.細胞處理：
復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過(guò)夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過(guò)夜）。第二天換液并檢 查細胞密度。
細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
 
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2■加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37C培
養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL 培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數換液方式，棄去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
 
細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。貼壁細胞凍存時(shí)，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細胞凍存時(shí)，應將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細胞吸走)，加 入部分新鮮培養基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍 存。
 
小鼠畸胎瘤細胞(P19)注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。