小鼠胚胎細胞（NIH/3T3）

小鼠胚胎細胞(NIH/3T3)
細胞介紹
與原始的隨機交配3T3和近交系BALB/c 3T3建株方法一樣，NIH/3T3，是從MH Swiss小鼠胚胎培養物中建立的高度接觸抑制的連續細胞株。為了培育在形態(tài)學(xué) 特征上更適合于進(jìn)行轉化分析的亞株，建立的MH/3T3細胞株又進(jìn)行了五輪以上亞克隆。這株細胞對DNA轉化及轉染研究十分有用。檢測表明肢骨發(fā)育畸形病 毒(鼠痘)陰性。
 
細胞特性
1)來(lái)源：胚胎
2)形態(tài)：成纖維細胞
3)含量：>lxl06個(gè)/mL
4)污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5)規格：T25瓶或者lmL凍存管包裝
 
運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細胞后，可在1000RPM，常溫條件下，離心5min后，于潔凈操作臺棄去上清，加入推薦使用的培養基后轉移至l〇cm培養皿或者T25培養瓶中培養，傳代達到細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存。具體操作見(jiàn)細胞培養步驟。
細胞用途：僅供使用。
 
小鼠胚胎細胞(NIH/3T3)細胞培養步驟
1)培養基及培養凍存條件準備：
1. 準備DMEM培養基(DMEM，GIBCO)，北美胎牛血清，15%，1% PS。
2. 培養條件：氣相：空氣，95%;二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3.凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
 
2)細胞處理：
1.復蘇細胞：將含有lmL細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速搖晃解凍，離心管加入4mL培養基混合均勻。在800-1000RPM條件下離心4-5分鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入T25培養瓶中 培養，補加培養基至6ml。
2.細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養。
棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
力口 lm丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中，置于37°C培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀(guān)察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2ml*培養基終止消化。
輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，加l-2mL 培養液后吹勻。
將細胞懸液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中。
3.細胞凍存：待細胞生長(cháng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細胞凍存。
 
下面T25瓶為例；
細胞凍存時(shí)，棄去培養基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml*培養基終止消化，可使用血球計數板計數。
1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標識。本公司按每個(gè)凍存管細胞數目大于1X106個(gè)細胞凍存。
將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 
小鼠胚胎細胞(NIH/3T3)注意事項：
收到細胞后，若發(fā)現干冰己揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們電聯(lián)。
所有動(dòng)物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過(guò)此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。