動(dòng)物細胞培養的必需條件:
在所有的細胞離體培養中,最困難的是動(dòng)物細胞培養。下面是它所需要的特殊條件。
⑴血清:動(dòng)物細胞離體培養常常需要血清。常用的是小牛血清。血清提供生長(cháng)必需因子,如激素、微量元素、礦物質(zhì)和脂肪。在這里,血清等于是動(dòng)物細胞離體培養的天然營(yíng)養液。
⑵支持物:大多數動(dòng)物細胞有貼壁生長(cháng)的習慣。離體培養常用玻璃,塑料等作為支持物。
⑶氣體交換:二氧化碳和氧氣的比例要在細胞培養過(guò)程中不斷進(jìn)行調節,不斷維持所需要的氣體條件。
動(dòng)物細胞培養的培養步驟:
注:所有步驟應在無(wú)菌無(wú)毒的超凈工作臺進(jìn)行。蛋白酶處理時(shí)間不宜過(guò)長(cháng)。
取離體的動(dòng)物組織,器官或細胞,剪碎并加入yi蛋白酶分解成單個(gè)細胞,配置形成細胞懸液。
制備動(dòng)物細胞培養液體培養基(需加入血清,保證無(wú)菌無(wú)毒),將細胞接種至培養基,放入二氧化碳培養箱中進(jìn)行初代培養。
當細胞增殖達到一定程度,出現接觸抑制現象時(shí),用yi蛋白酶再次處理,并用細胞懸液吹打貼壁生長(cháng)的細胞。進(jìn)行細胞計數。
依照計數結果,分瓶培養,進(jìn)行傳代培養。獲得細胞系或細胞株。