一、實(shí)驗目的

植物細胞和組織培養的技術(shù)性強，要求無(wú)菌操作，通過(guò)本實(shí)驗可初步掌握常規的組織培養技術(shù)，加深對無(wú)菌操作的了解。

二、實(shí)驗原理

植物的性：植物體的任何一個(gè)細胞都具有生長(cháng)分化成為一個(gè)完整植株的能力，稱(chēng)為植物的性。

植物組織培養就是利用植物的性進(jìn)行離體無(wú)菌植物培養的一門(mén)技術(shù)。植物組織培養按其原始意義，就是指愈傷組織培養。但發(fā)展至今，其范圍日益擴大，已包括植物和它的離體器官、組織、細胞和原生質(zhì)體的離體無(wú)菌培養。因此，擁有幾種不同水平的培養技術(shù)，即整體的、器官的、組織的、細胞的和原生質(zhì)的培養技術(shù)。

本實(shí)驗選擇豌豆為材料，豌豆(Pisumsativum)屬豆科植物，是糧食、飼料和重要的蔬菜作物，也是遺傳學(xué)家和植物生理學(xué)家感興趣和樂(lè )于采用的實(shí)驗植物，豌豆的根、莖、子葉、下胚軸、上胚軸、花芽等外植體，皆可形成愈傷組織，其中莖尖、幼胚、幼葉等器官可成功的再生成植株。莖尖培養可包括小至十幾微米的莖尖分生組織(生長(cháng)點(diǎn))和大至幾十毫米的莖尖或更大的芽培養。在實(shí)踐應用上，常采用生長(cháng)點(diǎn)的培養使患病植物去病毒，以達到挽救優(yōu)良品種，提高產(chǎn)量和質(zhì)量之目的。

三、實(shí)驗材料

儀器設備：

1. 酒精燈、三角燒瓶，培養皿。

2. 鑷子、剪刀、剖針。

3. 雙筒解剖顯微鏡。

4. 光照培養箱或溫室。

5. 材料煙草無(wú)菌苗、豌豆幼苗。

試劑：

1. MS培養基，植物激素：NAA、6-BA等。

2. 飽和漂液(次氯酸鈉)。

3. 70%酒精、100%酒精、酒精棉球。

4. 無(wú)菌水。

四、實(shí)驗步驟

豌豆苗的莖尖培養：

1、取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡(jiǎn)取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，(此步以后要求無(wú)菌)用無(wú)菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養皿中。

2、在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝去幼葉露出生長(cháng)錐，用滅菌的解剖針挑取帶著(zhù)兩至三個(gè)葉原基的生長(cháng)錐。

3、將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤(6-BA)的培養基上誘導愈傷組織形成，用封口膜將培養皿封好。

4、在恒溫培養箱中，26℃下,培養六周，形成愈傷組織，經(jīng)繼代后，可用于生根培養。