在運用ELISA方法測定抗體方面，通常所用的方法稱(chēng)為間接法，也是目前常用的方法，其原理：間接法首先用抗原包被于固相載體，這些包被的抗原必須是可溶性的，或者至少是極微小的顆粒，經(jīng)洗滌，加入含有被測抗體之標本，再經(jīng)孵育洗滌后，加入酶標記抗抗體，(對人的標本來(lái)說(shuō)即加酶標抗人球蛋白IgG、IgM)，再經(jīng)孵育洗滌后，加底物顯色，底物降解的量，即為欲測抗體的量，其結果可用目測或用分光光度計定量測定。

操作步驟：

1. 將抗原按5μg/ml稀釋于碳酸鹽緩沖液(pH 9.6)，100μl /孔，4℃過(guò)夜。

2. 次日PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

3. 加2％BSA封閉室溫1h，200μl /孔。

4. 陽(yáng)性對照從10ug/ml，做倍必稀釋?zhuān)郎y血清從1：50做倍比稀釋?zhuān)A試驗后確定稀釋倍數及陽(yáng)性對照的起始濃度及稀釋數量(以可以做標準曲線(xiàn)為參數)，室溫1h。

5. PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

6. 加入1：3000(不同公司有不同的推薦稀釋度)PBS-T稀釋的HRP標記的山羊抗人IgG，100μl /孔，室溫1h。

7. PBS－T清洗4次(快1慢3，間隔5分鐘)。

8. 顯色，100μl /孔，顏色變深后中止顯色，2M硫酸在BIO-RAD酶標儀上讀數，可用ABTS，OPD，TMB等。