ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在實(shí)驗中得到了廣泛應用,然而新手們面對各種各樣、動(dòng)則上千種的ELISA試劑盒,內心應該是崩潰的。各種廠(chǎng)家、品牌,各種種屬,各種參數,琳瑯滿(mǎn)目,質(zhì)量良莠不齊,如何浪里淘金,選擇既符合研究需求,又品質(zhì)上乘的 ELISA 試劑盒呢?今天教教大家如何正確找到合適的ELISA試劑盒。
1.要明確樣本類(lèi)型
不同廠(chǎng)家驗證樣本類(lèi)型不同,即使同一廠(chǎng)家不同試劑盒,其驗證樣本類(lèi)型也不盡相同。特別是復雜的血漿樣本,根據樣本處理方式的差異,分為 EDTA 血漿、肝素抗凝血漿和檸檬酸鹽血漿,因此購買(mǎi)前需仔細核對。
2.要會(huì )預測自己的目標因子的濃度
一般來(lái)說(shuō),待測因子可以根據經(jīng)驗或資料獲得參考的檢測范圍,且正常人與疾病狀態(tài)存在差異。如熱門(mén)炎癥因子 IL-6,正常人血清中濃度為 3.13 pg/mL,病人會(huì )顯著(zhù)增高,CAR-T 回輸病人血清中的 IL-6 濃度甚至為正常人的 200 倍以上。因而,必要時(shí)進(jìn)行樣本的稀釋及選擇合適檢測范圍的試劑盒極其重要。若濃度太低,可選擇高敏試劑盒;若不確定待測濃度或樣本間濃度差異較大,建議使用檢測動(dòng)態(tài)范圍更寬的化學(xué)發(fā)光法ELISA試劑盒。如同樣為 IL-6 ELISA 試劑盒,各類(lèi)型檢測范圍差異較大,需要根據實(shí)際情況選擇合適的試劑盒。
3.檢查試劑盒進(jìn)行過(guò)哪些質(zhì)控
質(zhì)控數據在說(shuō)明書(shū)中即可找到,在購買(mǎi)前檢查試劑盒是否進(jìn)行過(guò)嚴格的質(zhì)控實(shí)驗,包括批次內(Intra-Assay)及批次間(Inter-Assay)、摻入回收實(shí)驗、線(xiàn)性稀釋實(shí)驗及交叉反應測試等,每個(gè)數據好都看一下,確保結果重現性及準確性。
4.確定需檢測的因子數量
如果待測因子超過(guò) 5 個(gè),且樣本量較小時(shí),單因子 ELISA 檢測方法并不是。建議考慮多因子檢測方法,如固相芯片(樣本數量一般 5 個(gè)以?xún)?,檢測指標可達上百個(gè))及 Luminex 液相芯片方法(檢測樣本多達 80 個(gè),檢測指標多達 50 個(gè))或微流控 ELISA 檢測系統 Ella??晒澕s樣本及時(shí)間成本,也可保證檢測結果準確。
5.預算評估
預算往往是大家優(yōu)先考慮的,實(shí)際上,不能夠一味講究產(chǎn)品價(jià)格,更需要考慮性?xún)r(jià)比。生物學(xué)是極其嚴謹的科學(xué),一致性的實(shí)驗結果是基金、文章等評審過(guò)程中的因素,即使低廉的價(jià)格,不能夠重現結果,也是資源的另一種浪費。
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