上海酶聯(lián)生物凍存的原代細胞應該如何培養,我司以客戶(hù)為核心,以產(chǎn)品質(zhì)量求生存,以售后服務(wù)求信譽(yù),原代細胞通過(guò)不斷改進(jìn)來(lái)提高效率,絕不以犧牲品質(zhì)作為代價(jià)。
原代細胞是指從機體取出后立即培養的細胞。有人把培養的第1代細胞與傳10代以?xún)鹊募毎y稱(chēng)為原代細胞培養。原代細胞不僅廣泛應用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫學(xué)基礎研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等。
一、凍存原代細胞的培養
1.將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。
2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體*融化。
3.將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無(wú)菌環(huán)境。
4.用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
5.打開(kāi)蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì )有少量溢出,這是正?,F象)。
6.用多聚賴(lài)氨酸包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細胞。
7.蓋好培養瓶的蓋子,輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開(kāi)蓋子。
8.將培養瓶放入培養箱中。
9.放入培養箱后第6-16小時(shí)更換一次培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
二、原代細胞的組織塊培養法:
1.組織塊接種后的前3天,在觀(guān)察和移動(dòng)的過(guò)程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng),否則組織塊不易附著(zhù)于瓶壁上或附著(zhù)后也會(huì )脫落飄起。
2.加入的培養液不宜過(guò)多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。
3.當細胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì )影響原代細胞的生長(cháng)。
4.為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養瓶底壁上。
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