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酶聯(lián)免疫試劑盒一般有3次加樣步聚
更新時(shí)間:2021-01-26   點(diǎn)擊次數:2123次

酶聯(lián)免疫試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的試驗診斷辦法。由于其試劑安穩、易保存,成果判別較客觀(guān)等要素,已廣泛使用在免疫學(xué)查驗的各領(lǐng)域中。酶聯(lián)免疫試劑盒在國內有許多種叫法:例如:ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯(lián)免疫試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒、酶聯(lián)免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等,比較常見(jiàn)的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒等。

酶聯(lián)免疫試劑盒中一般有3次加樣步聚,即加標本,加酶結合物,加底物。加樣時(shí)應將所加物加在ELISA試劑盒板孔的底部,防止加在孔壁上部,并留意不可濺起,不可發(fā)生氣泡。
 
加標本一般用微量加樣器,按規則的量參加板孔中。每次加標本應更換吸嘴,以免發(fā)生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測定需用稀釋的血清,可在試管中按規則的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中參加稀釋液,酶聯(lián)免疫試劑盒再在其間參加血清標本,然后在微型震動(dòng)器上震動(dòng)1分鐘以保證混和。加酶結合物使用液和底物使用液時(shí)可用定量多道加液器,使加液進(jìn)程敏捷完成。在ELISA檢測試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標本和加酶結合物后??乖贵w反響的完成需求有必定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱(chēng)為溫育,有人稱(chēng)之為孵育,在ELISA中似不恰當。
 
ELISA屬固相,抗原、抗體的結合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標本,其間的抗原并不是都有均等的和固相抗結合的時(shí)機,只要貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體觸摸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)擴散才干達到反響的結尾。在其后參加的酶標記抗體與固相抗原的結合也同樣如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時(shí)刻的溫育。
 
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗室中常用的保溫溫度,也是大多數抗原抗體結合的合適溫度。在樹(shù)立ELISA辦法作反響動(dòng)力學(xué)研討時(shí),試驗表明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),酶聯(lián)免疫試劑盒產(chǎn)品的可達高峰。為加速反響,可提高反響的溫度,有些試驗在43℃進(jìn)行,但不宜采用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為*,在放射免疫測定中多使反響在冰箱中,以形成多的沉積。但因所需時(shí)刻太長(cháng),在ELISA中一般不予采用。

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