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噬菌體抗體庫技術(shù)
更新時(shí)間:2019-10-09   點(diǎn)擊次數:1852次

噬菌體抗體庫技術(shù)是近年發(fā)展起來(lái)的一項新的基因工程抗體技術(shù)。它是將體外克隆的抗體基因片段插入噬菌體載體,轉染工程細菌進(jìn)行表達,然后用抗原篩選即可獲得特異的單克隆噬菌體抗體。利用這一技術(shù)可以得到*人源性的抗體,在HIV等病毒感染和腫瘤的診斷與治療方面有其*的*性。  

(一)基本原理和程序
 噬菌體抗體庫技術(shù)的原理,簡(jiǎn)言之就是用PCR技術(shù)從人免疫細胞中擴增出整套的抗體重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)基因,克隆到噬菌體載體上并以融合蛋白的形式表達在其外殼表面。這樣一來(lái)噬菌體DNA中有抗體基因的存在,同時(shí)在其表面又有抗體分子的表達,就可以方便地利用抗原—抗體特異性結合而篩選出所需要的抗體,并進(jìn)行克隆擴增。使抗體基因以分泌的方式表達,則可獲得可溶性的抗體片段。在建庫過(guò)程中如果將VH和VI。隨機組合,則可建成組合抗體文庫;如果抗體mRNA來(lái)源于未經(jīng)免疫的正常人,則可以在不需要細胞融合的情況下建立起人天然抗體庫。

構建噬菌體抗體庫通常包括以下幾個(gè)過(guò)程:①從外周血或脾、淋巴結等組織中分離B淋巴細胞,提取mRNA并反轉錄為cDNA;②應用抗體輕鏈和重鏈引物,根據建庫的需要通過(guò)PCR技術(shù)擴增不同的Ig基因片段;③構建噬菌體載體。噬菌體抗體庫載體有入噬菌體、絲狀噬菌體和噬菌粒三種,其中后二者是目前構建表面表達的噬菌體抗體庫(surfacedisplayantibody library)常用載體;④表達載體轉化細菌,構建全套抗體庫。通過(guò)多輪的抗原親和吸附—洗脫—擴增,zui終篩選出抗原特異的抗體克隆。
 
(二)噬菌體抗體庫技術(shù)的特點(diǎn)

1.避免使用人工免疫和雜交瘤技術(shù)  由于抗體庫的大容量和*的篩選效率,使得可以調出任意抗體基因,用基因工程方法制備抗體,從而避免了使用人工免疫動(dòng)物和細胞融合技術(shù)。

2.模擬天然全套抗體庫  抗體文庫可以達到或超過(guò)1011庫容,所以能包含B細胞全部克隆。建庫的外源基因來(lái)自人體外周血,骨髓或脾臟的淋巴細胞提取的mmDNA,mmDNA反轉錄形成cDNA,這些mRNA是人體多克隆細胞的總mRNA。使用的通用引物采自多個(gè)人體,具有人的種屬普遍性??贵w的VH和VL基因的隨機重組也增加了抗體的多樣性。

3.可獲得高親和力的人源化抗體  在中,VH和VL基因的隨機重組模擬了體內抗體親和力成熟的過(guò)程,所用的抗體基因又來(lái)自人體,因此,所產(chǎn)生的抗體必然都是高親和力的人源化抗體。

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