實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RealTime PCR)技術(shù)服務(wù)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)即是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號實(shí)時(shí)監測整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過(guò)標準曲線(xiàn)對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR避免了傳統PCR以終產(chǎn)物檢測定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗的重復性。該技術(shù)已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化；比較不同組織的 mRNA表達差異；驗證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗結果等。

SYBR Green熒光染料法

SYBR Green是一種DNA結合染料，能非特異地摻入到雙鏈DNA中去。在游離狀態(tài)下，它不發(fā)出熒光，但一旦結合到雙鏈DNA中以后，便可以發(fā)出熒光。

它的大優(yōu)點(diǎn)就是可以與任意引物、模板相配合，用于任意反應體系中。從經(jīng)濟角度考慮，它也比其它的探針的價(jià)格要便宜得多。但由于它能與所有的雙鏈DNA結合，所以一旦反應體系中出現非特異擴增，那它就會(huì )影響到定量結果的可靠性與重復性。

要避免這種不利因素，可以通過(guò)選擇良好的引物并優(yōu)化反應條件以消除非特異性影響。

TaqMan熒光探針?lè )?/span>

PCR擴增時(shí)在加入一對引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標記一個(gè)報告熒光基團和一個(gè)淬滅熒光基團。

探針完整時(shí)，報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時(shí)，Taq酶的5-3外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號。

即每擴增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。