ELISA試劑盒的基本原理就是將抗原抗體固定到特定的載體上進(jìn)行反響,并經(jīng)過(guò)酶催化底物發(fā)作化學(xué)變化將抗原抗體反響經(jīng)過(guò)色彩的方式顯現出來(lái)。
1,酶反響:酶能夠經(jīng)過(guò)共價(jià)鍵與抗原或抗體銜接形成結合物,當抗原抗體反響的時(shí)分,被檢測靶方針中也結合了酶分子。
2,抗原抗體反響:抗原或抗體在恰當的介質(zhì)下可進(jìn)行特異的抗原抗體反響。
3,關(guān)閉:固相吸附蛋白對錯特異性的,在包被意圖免疫蛋白后,未吸附蛋白的固相外表依然有吸附其它蛋白的能力,為了保證抗原抗體反響的特異性,因而,包被剩余的固相外表應該用抗原抗體反響無(wú)關(guān)蛋白關(guān)閉。一般以為牛血清白蛋白是為理想的關(guān)閉劑,也可用脫脂奶粉、明膠、牛血清替代。
4,ELISA試劑盒將抗原抗體反響固相化:即實(shí)驗中的包被環(huán)節,使抗原或抗體吸附于固相載體外表。其機制可能是聚苯乙烯外表間的疏水基團能夠無(wú)挑選性地吸附蛋白分子。此物理性吸附不損壞蛋白分子結構,堅持其生物學(xué)特性和免疫學(xué)活性;
5,底物反響:結合在抗原抗體中的酶分子,能夠促進(jìn)底物發(fā)作色彩反響,檢測人員能夠裸眼調查,能夠經(jīng)過(guò)色彩來(lái)斷定是否有免疫反響的存在,經(jīng)過(guò)色彩的深淺判斷標本中相應抗原或抗體的含量,也可借用酶標儀在恰當的波長(cháng)讀取吸光度值。