生物材料準備

    生物材料凍存前進(jìn)行的準備工作可能會(huì )對凍存結果產(chǎn)生影響。對于非復制性材料，如組織，核酸和蛋白等，準備過(guò)程包括確認生物材料處于合適的溶液或凍存培養基中，此步驟的目的在于復蘇時(shí)達到zui大化的預期用途。然而，活細胞和微生物的穩定性及復蘇活力受生長(cháng)條件和凍存前準備工作的影響。

    細胞凍存前需考慮多種因素，包括細胞類(lèi)型、活力、生長(cháng)條件、生理狀態(tài)、數目以及細胞前處理等。當建立一個(gè)新分離株或細胞系的初次種子儲備時(shí)，必須對培養物進(jìn)行檢測并消毒，確保微生物污染的zui小化。每次準備工作后，以及每次準備新批次的培養物時(shí)，均要重復這個(gè)步驟。

微生物

    生長(cháng)于通氣培養條件下的微生物細胞，特別是細菌和酵母，表現出比生長(cháng)于非通氣條件下的細胞更強的耐受冷卻和凍存傷害 的能力。T.Nei 認為，在通氣培養條件下，細胞通透性更好，且開(kāi)放條件下培養細胞在冷卻過(guò)程中比非通氣條件下培養的細胞失水更快。另外，針對微生物細胞，在對數生長(cháng)期后期及穩定期早期獲得的細胞表現出更強的冰凍耐受性。從生長(cháng)后期和靜態(tài)培養早期收集的微生物細胞比生長(cháng)早期和生長(cháng)晚期的細胞表現了更強的冰凍耐受性。

    一般來(lái)講，初始凍存的細胞數目越多，復蘇率越高。對于大多數細菌和酵母而言，保證約 107/ml 的細胞數才能確保足夠數量的細胞復蘇。由于這些細胞可便捷地從瓊脂培養板或斜面上收集，如果需要更大量的細胞，也可使細胞生長(cháng)于液體培養基中通過(guò)離心收集，在任何一種情況下，細胞通常懸浮在包含凍存保護劑的新鮮培養基中。原生生物可以通過(guò)離心濃縮，但通常需要懸浮于使用的培養基中，之后使用等體積含凍存保護劑的新鮮培養基稀釋。

    針對芽孢菌凍存，需要收集芽孢并重懸于含凍存保護劑的新鮮培養基中。凍存前，必須縮短操作時(shí)間且確保芽孢并未萌發(fā)。針對非芽孢菌凍存，凍存前需采用特殊程序收集菌絲體。某些具硬菌絲體的真菌，需將含有菌絲體的瓊脂塊從培養基中切出，并將其置于含凍存保護劑的新鮮培養基中。硬菌絲體無(wú)法與瓊脂培養基很好粘附，生長(cháng)于肉湯培養基中時(shí)，凍存前需將菌絲體團進(jìn)行混合。

    凍存材料的活力和復蘇率由凍存前后的培養和生長(cháng)狀態(tài)決定?；盍κ呛饬颗囵B物生長(cháng)和繁殖的一項指標。例如原生生物材料等某些材料，需經(jīng)過(guò)多次傳代才能保證其穩定性。復蘇細胞數量的估算有多種方法，包括連續稀釋?zhuān)桨逵嫈祷蛑苯蛹毎嫈?。通過(guò)對比凍存前和復蘇后細胞數量的差異，可說(shuō)明細胞復蘇程度 或凍存過(guò)程是否成功。